Nalezljive rake

Nalezljive rake

Natalia Reznik,
Kandidat bioloških znanosti
"Kemija in življenje" št. 5, 2016

Onkološke bolezni bi bile še slabše, če bi bile prenosljive, to je, če bi jih neposredno prenašale rakave celice od bolne osebe do zdravega. Na srečo imunski sistem uničuje rakave celice tujih teles, tako kot zavrača presajene organe in tkiva. Obstajajo presadljivi tumorji, da eksperimentanti okužijo laboratorijske živali, vendar se ti poskusi izvajajo na posebnih linijah gensko identičnih glodavcev. V naravnih razmerah rak ni nalezljiv, razen če ga povzročijo kužni povzročitelji, na primer onkogeni virusi. Toda, kot se je izkazalo, nekaj živali ni imelo sreče. Trenutno so znani trije maligni prenosljivi tumorji. Po izvoru so celice vsakega tumorja kloni, to je, da imajo skupen prednik; Med njimi so bili zaraščeni z mutacijami in niso popolnoma genetsko enaki drug drugemu, čeprav so precej homogeni.

Najstarejša celična linija

V državah z zmernim podnebjem je prenosljiv venerični tumor psov (TVOS) pogost med divjimi in pseči psi.V različnih državah 1-10% psov trpi zaradi tega, v Kanadi, Združenem kraljestvu, nekaterih evropskih državah in na Novi Zelandiji je zaradi visoke ravni veterinarske oskrbe bolezen praktično poražena (tumor dobro odgovarja sevanju in kemoterapiji).

Prvi pes, ki se okuži z rakom, bi lahko izgledal nekaj takega.

TVOS je dobro proučen, prvič ga je leta 1810 opisal veterinar veterinar iz Londona leta 1810 kot sarkom za nalepke, leta 1876 pa je ruski veterinar Mstislav Aleksandrovič Novinsky dokazal, da je prenašal sluznico genitalnih organov zdrave živali s tumorjem. Sodobne študije so potrdile, da za nastanek in prenos tumorja ni nobenih povzročiteljev okužbe. Zdravi živali se okužijo z njo kot posledica naravnega prenosa živih rakavih celic. Prenese ga spolno s strani TBOS in vpliva na zunanjo genitalijo moških in žensk. Parjenje psov se konča z dolgim ​​"zaklepom", v katerem se genitalije živali tesno prilegajo. V tem primeru so sluznice pogosto poškodovane, kar prispeva k širjenju tumorja. Je svetlo rožnate barve, sestavljena je iz več lamel in doseže premer 10 cm.Raziskovalci so dolgo verjeli, da se TVOS ni metastaziral, v zadnjih letih pa je bilo odkritih do 5-7% primerov metastaz.

Tumor lahko okuži tudi druge kanide – volkove, lisice in kojote; Poskusi, da bi ga presadili na miši, podgane, hrčke in mačke, se je končalo zaman.

Psi so deloma z venerastim prenosljivim tumorjem srečen, ker se ne le zlahka zdravijo, temveč se pogosto razrešuje. Različni podatki kažejo na drugačno frekvenco in časovni razmik regresije, ki je odvisna od stanja imunskega sistema in živalskega genotipa. Regresijski mehanizem ni povsem jasen. Ko je tumor rešen, pes pridobi imuniteto za ponovno okužbo, njen serum ščiti pred prenosom živali, ki še niso bile bolne.

Po podatkih histologov in imunologov so celice TVOS-a pridobljene iz celic mieloidne serije, po možnosti tkivnih makrofagov. Genetika sta poskušala ugotoviti čas nastanka tumorja in videz prenašalca (Znanost, 2014, 343, 437-440, doi: 10.1126 / znanost. 1247167). Primerjali so genomske sekvence tumorjev iz dveh različnih populacij: divjih psov Avstralije in ameriškega koker španela iz Brazilije ter DNA zaporedij klonov raka in genomov različnih pasem psov, volkov in kojotov.Znanstveniki so ugotovili, da je tumor nastal pred približno 11 tisoč leti. Nedavne študije so omogočile primerjavo sekvenc določenih genov in zunanjih znakov psa. Po analizi teh sekvenc v celicah TVOS so znanstveniki prišli do zaključka, da je tumor izviral iz velikega ali srednjega črnega ali agouti psa (vsak las ima črno konico, nato rumeno cono, nato pa črno in svetlo bazo znova). V svojem genomu so bili prisotni volkovi aleli, zato je bil predstavnik ene najstarejših pasem psov, prednikov Alaskanskega Malamuta, Huskyja in nekaterih drugih. Tumor že dolgo obstaja v precej izolirani populaciji z malo genetske raznolikosti, pred približno 460 leti pa se je začela širiti po vsem svetu.

Enajst tisoč let so tumorski kloni prešli iz enega gostitelja v drugega, TBOS pa najstarejša stalna celična linija. V tem času so njene celice nakopičile 1,9 milijona mutacij: enojne nukleotidne substitucije, vstavki, delecije in strukturne preureditve, ki so prizadele več kot 10 tisoč genov. To je stotinekrat več kot v človeških rakavih celicah.Mnoge od teh mutacij spominjajo na tiste, ki se pojavijo pod vplivom ultravijoličnega sevanja v človeških celicah melanoma. Očitno je razvoj SCNT-a potekal tudi z ultravijolično sevanjem z nizko intenzivnostjo: čeprav se tumorji pojavljajo znotraj odprtine za genitalije, včasih na površini štrlijo. Mutacije vplivajo na vse faze imunskega odziva telesa, uravnavanje delovanja genov, nekatere ključne onkogene. Ta vključenost je rezultat tisoče let izbora.

Devilish tumor

Drug prenosljiv tumor je neprimerno mlajši od TVOS in je geografsko lociran. Tasmanski hudič obrazni tumor (LOTD) je bil odkrit na severu Tasmanije leta 1996, čez deset let se je razširil po celem otoku in prevzel epidemični značaj, ki je dal Tasmanijevega đavolskega koščkov Sarcophilus harrisii na robu izumrtja.

Tumor prizadene kožo na obrazu in sluznice v ustni votlini se hitro širijo in povzročajo nekrozo in razjede. Približno 65% primerov tvori metastaze v notranjih organih, predvsem v pljuča. Smrtnost v njej je absolutna, v 3-9 mesecih žival umre zaradi lakote, zadušitve ali malignih tumorjev v notranjih organih.LOTD se razprostira skozi ugriz: tasmanski hudiči imajo nesahantno navado, da se med parenjem grizijo ali skupaj jedo, kar najdejo. Čeprav tumor ni vener, mladi se ne razbolijo; morda zato, da bi bili ugrizeni med skupnim obrokom, morajo doseči zrelost.

Tasmanski hudiči ne trpijo zaradi otekanja obraza

Tasmanski raziskovalci Anne-Marie Perce in Kate Swift so leta 2006 odkrili, da je tumor prenosljiv, saj imajo vse njegove celice enake kromosomske preureditve, to so kloni. Kasneje so to potrdili z raziskavami mtDNA iz 104 tumorjev. Britanska raziskovalka Elizabeth Murchison se je aktivno udeležila tega dela, preučila pa je tudi genoma TVOS. Sodeč po beljakovinah, ki jih LOTD izraža, je bil prednik tumorja Schwannova celica (te celice tvorijo mielinski plašč živčnih vlaken). LOTD je specifičen za vrsto, ni bilo mogoče inokulirati miši, ni bilo mogoče najti v drugih Tarsmanijah, čeprav jih eksperimentalno ni poskušalo okužiti.

Po določitvi genomskih zaporedij dveh zdravih tasmanskih hudičev in dveh tumorskih celičnih linij so znanstveniki v vsaki vrstici našli 15-17 tisoč somatskih mutacij.Mutacije omogočajo, da rakave celice izginejo imunski sistem gostitelja, zato jim genetska podobnost pomaga pri tem. Posamezniki iz šestih različnih regij so genetsko zelo blizu. To je posledica omejenega habitata in učinek ustanovitelja, saj je otoška populacija tasmanskih hudičev potomcev več živali.

V letu 2014 je bil pri petih moških v jugovzhodni Tasmaniji odkrit nov klon LOTD (Zbornik Nacionalne akademije znanosti, 2016, 113, 374-379, doi: 10.1073 / pnas.1519691113). Zunaj so tumorji LOT1 in LOT2 neustrezljivi, vendar histološko različni in imajo različne genetske označevalce. Presenetljivo se je v Tasmaniji znova pojavil nov prenosljiv klinični rak. Morda so tasmanski hudičev preobčutljivi na nove rasti in skupaj z navado grizenja in nizke genetske raznovrstnosti je to povzročilo veliko ranljivost. Ampak, če je tako, je čudno, da do leta 1996 nič ni bilo znano o LOTD. Ni izključeno, da so nekateri novi dejavniki, vključno z antropogeni ali patogeni, prizadeli živali. Druga razlaga je, da so prenosljivi raki dejansko bolj pogosti kot pogosto verjeli.

Kakor koli že, lahko tasmanski hudiči izginejo v 35 letih.Strokovnjaki na University of Tasmania razvijajo cepivo, ki temelji na mrtvih celicah LOTD (Cepivo, 2015, 33, 3016-3025, doi: 10.1016 / j.vaccine. 2015.01.039). Zaščitila je eno živalko od šestih, njena dejanja pa so bila dovolj za eno leto, nato pa je treba imunizacijo ponoviti. Medtem ko se cepivo izboljšuje, je po mnenju znanstvenikov edini izhod za izolacijo zdravih živali in razvijanje metod za izločanje bolnih hudičev pred prebivalstvom. Ampak ne glede na to, kaj ljudje počnejo, je treba storiti zelo hitro.

In hrčki hkrati

Sirski hrčki okuženi z rakom v vivarijih

V letih 1945-1981 v znanstvenih periodičnih publikacijah so poročali o prenosljivih tumorjih sirskih hrčkov Mesocricetus auratusgojene v vivarijih. Za razliko od prenosljivih tumorjev domačih psov in tasmanskih hudičev, ki so se po nastanku že desetletja ali celo stoletja prenesejo iz živali na zver, so se v različnih eksperimentalnih populacijah spontano pojavile transmisivne tumorje hrčka. To so izredno agresivni tumorji, metastaze nastanejo skoraj na dan okužbe. Za razvoj teh tumorjev niso odkrili nobenih virusov. Leta 1975 je prišlo do poročila o epidemiji limfoma, ki se spontano pojavlja v vivarijih, kjer so vzrejeni plemenski črevesni hrčki.Epidemija ni bila povezana s praskanjem, grizenjem, spolnostjo ali jedo rakavih celic (hrčki včasih gnojijo tumorje in imajo kanibalizem). Ko so zdravim hrčkom pritrjeni na obolele živali, so razvili isto vrsto tumorja kljub skoraj sterilni čistosti vivarija. Možno je, da so komarji nosili tumor in služili so kot pasivni nosilci, rakave celice pa se niso množile v njih. In vivo, epidemije limfoma niso opisane.

Brezkontaktni prenos

Tretji od sedaj znanih transmisivnih tumorjev, ki krožijo in vivo, najdemo v školjki školjke Mya arenaria. Ta užiten mehkužec, ki živi od vzhodne obale Severne Amerike, trpi zaradi levkemije od konca sedemdesetih let. V mehkužcih ni kri, temveč hemolimf. Plovila, skozi katera teče, niso zaprta, njegove celice hemocitov izvajajo zaščitne funkcije v telesu školjke, podobne fagocitnim sesalcem. V tumorju hemociti aktivno delijo, spremenijo obliko (slika 1), izgubijo sposobnost za fagocitozo in zamašijo hemolimf in tkivo peščene lupine, kar povzroči njegovo smrt.Na mnogih mestih so mehkužci praktično izginili.

Sl. 1. Hemocitna peščena školjka Mya arenaria, zdrav (na levi strani) in neoplastični (na desni). Tumorske celice izgubijo značilno obliko rasti, postanejo majhne in okrogle

"Leukoze" peščene lupine aktivno preučujejo strokovnjaki na univerzi Columbia (ZDA) in kanadskih okoljevarstvenikov (Celica, 2015.161, 255-263, doi: 10.1016 / j. celica 2015.02.042). Po analizi genomske in mtDNK tumorskih celic so ugotovili, da genotipi tumorja ne sovpadajo z genotipom gostiteljev. Poleg tega so vsi neoplastični hemociti s peskanih školjk, razpršeni vzdolž atlantske obale Severne Amerike, potomci ene rakave celice. Mehanizem, s katerim se celice lahko prenesejo od živali do živali na stotine kilometrov, je nejasno. Cisterne niso v stiku med seboj. Ko se je naselil na dnu ličinke, je mehkužnik ostal na enem mestu. On proizvaja hrano s filtriranjem morske vode. Morda so bile v telesu enake tumorske celice. Poskusi so pokazali, da preživijo v morski vodi več kot šest ur. Med bolezni, drstmi ali po smrti bolnega mehkužca bi lahko vstopili v vodo.V zadnjem desetletju so ljudje aktivno razredčili peščene školjke in jih premikali vzdolž obale, kar je verjetno prispevalo k širjenju tumorja.

Podobni tumorji se razvijejo tudi v drugih školjkah v isti regiji Severne Amerike, na primer v školjkah in ostrige. Še ni znano, ali so ti tumorji pridobljeni iz peščene lupine ali ima vsaka vrsta svoj prenosen rak. Medvizijski prenos tumorja je možen; kot se spominjamo, TWOS prizadene ne le pse, ampak tudi druge kanine. Raziskovalci načrtujejo ugotoviti izvor rakavih celic v drugih mehkužcih. Če se izkaže, da so tumorji specifični za vrsto, se je ob atlantski obali v Ameriki oblikovalo posebno okolje, ki je ugodno za hkratno pojavljanje več transmisivnih rakov. Za človeka ti tumorji niso nevarni, vendar mehkužci umrejo in je do sedaj edini možen izhod karantena, ki bo preprečila širjenje bolezni še bolj južno do obale Floride.

Kako to počnejo?

Sposobnost transmisivnih tumorjev za kolonizacijo novih gostiteljev nasprotuje tradicionalnim zamislim o odzivu imunskega sistema na tuje tkiva. Spomnimo se izraza "allograft".Tako imenovani presadek (tkivo ali organ), izoliran iz ene posameznice in presajenih posameznikov iste vrste, vendar drugačnega genotipa, to je od psa do psa, od osebe do osebe. Tujec rakave celice so tudi alograft. Da bi se naselili na novem mestu, ovira histokompatibilnost. V izjemno poenostavljeni obliki izgleda tako. Na površini skoraj vsake evkariontske celice sesalca obstajajo proteini glavnega kompleksa histokompatibilnosti razreda I (v angleščini glavni kompleks histokompatibilnostiskrajšani MHC). Njihova raznolikost je tako velika, da ni dveh posameznikov z istim nizom MHC beljakovin, če niso identični dvojčki. Razlike med donorjem in prejemnikom MHC povzročim zavrnitev presadka. Citotoksične T-celice imunskega sistema nenehno pregledujejo MHC I. Po ugotovitvi svoje tujosti sproščajo beljakovine perforin, ki prežema membrano gostiteljske celice in jo uniči. Helperove celice, ki aktivirajo B-celice, ki sintetizirajo protitelesa proti cepljenju, reagirajo tudi na tuje MHC I.

Nevretenčarji, kot so školjkasti mehkužci, nimajo tako zapletenega sistema prepoznavanja tkiv kot prepreke histokompatibilnosti, zato morajo biti bolj dovzetni za prenosljive tumorje.Raziskovalci opozarjajo na to, da se v rakavih celicah mehkužcev spreminja aktivnost mnogih genov in načrtujejo natančno ugotoviti, katere mutacije so privedle do nastanka tumorskega fenotipa.

Kar se tiče transmisivnih tumorjev sesalcev, je njihovo porazdelitev najprej olajšala nizka genetska raznovrstnost in izolacija gostiteljskih populacij. TVOS se je prvič pojavil v ločeni populaciji psov, v katerem se je razvil več tisoč let, dokler se ni začel širiti po vsem svetu. Tasmanski hudiči so še vedno izolirani, zaporedja genov MHC različnih posameznikov pa sta zelo podobni. Vendar nizka raznolikost MHC ne more razložiti transmisivnosti tumorja, ker se tasmanski hudičevi alografti kože zavržejo v 14-21 dneh.

Pomemben del celic transmisivnih tumorjev na površini nima molekul MHC I, zaradi česar ostajajo neprepoznavni za T-limfocite. Druge imunske kompetentne celice, normalni morilci (NK), morajo reagirati na allografta brez MHC beljakovin, vendar jih zaradi tega ne. Kljub temu so celice TWOS in LOTD ohranile sposobnost izražanja MHC pod določenimi pogoji.Tasmanski hudičev tumor na ta način reagira na uvedbo γ-interferona (vendar imunokompetentne celice še vedno ne morejo spoprijeti z njim), in pesni tumor zarašča z antigeni pred regresijo. To pomeni, da so zaporedja genov MHC v redu in se ne izražajo zaradi mutacij v genih, ki vplivajo na strukturo celičnih membran, nastanek, prevoz in predstavitev antigenov na celični površini. Veliko teh genov je znano, vendar ne bomo zdaj razpravljali o njih, da ne bi zapletli zgodbe. V Tasmanskih hudičih tumorjih lahko na izražanje MHC proteinov vpliva sprememba stopnje metilacije DNA, ki določa strukturo kromatina. Druga metoda zaščite pred imunskim sistemom gostitelja je sinteza imunosupresivov.

Raziskovalci so še posebej zainteresirani za fenomen regresije TVOS: upajo, da bo razumevanje mehanizma tega procesa omogočilo regresijo drugih transmisivnih tumorjev in morda tudi transmisivnih. Čeprav je malo znano. T-celice in B-limfociti, verjetno NK-celice, prodrejo v rastoči tumor. Potem se na površini rakavih celic pojavijo proteini MHC, rast tumorja pa se nadomesti z regresijo.Istočasno limfociti aktivno izločajo pro-vnetne citokine interleukin-6 in γ-interferon. Raziskovalci ne vedo, kaj služi kot signal za prehod iz rasti TVOS v regresijo.

T-limfociti ne morejo prodreti globoko v LOTD in množiti po robovih. Možno je, da rakave celice ustvarjajo določeno mikro okolje, ki v nekaterih primerih prehaja T-limfocite navznoter in ne v druge.

Kakor koli že, znanstveniki še ne morejo podrobno pojasniti, ali je sposobnost transmisivnih tumorjev, da izginejo imunski sistem.

Parazit se spremeni v tumor

Celica, ki je prodrla v tuje telo in se reproducira v njej, se lahko poveže s parazitom. In če se prenosljivi tumor obnaša kot parazit, zakaj parazit ne sme postati tumor?

Do zdaj so znani trije primeri. Leta 1968 je med kemoterapijo umrl bolnik s Hodgkinovo boleznijo in ob obdukciji ugotovil, da ima strukture, ki spominjajo na ciste parazitskih črv, razpršene v notranjih organih, krvnih žilah, bezgavkah in podkožnih tkivih. Morfologi so se odločili, da so to ličinke ličinke ličinke Hymenolepis nana. Vzorci tkiv so bili ohranjeni, leta 2003 pa so analizirali DNA, kar je potrdilo diagnozo parazitologov.Leta 1996 je 44-letni mož doživel več tumorjev v jetrih in bezgavkah. Žal je na bolečino, vročino, hujšanje in umrl 10 tednov kasneje. V njegovih tkivih so našli grozdje ciste verige Skrjabinoporus merops. Ta črv je parazit tropskih ne-vodnih ptic. On običajno ne okuži ljudi, vendar njegova jajca lahko slučajno pridejo v telo z nekim proizvodom, kontaminiranim z aviarnimi iztrebki, in imunsko odložen bolnik, ki je izčrpan s sevanjem in kemoterapijo, je razvil okužbo.

Bolezen 41-letnega kolumbijanca, ki ima AIDS in je okužen s čebelasto verigo, z majhnimi tumorji v pljučih in bezgavkah (slika 2), najbolje raziskuje. Bolnik je pregledal Državni center za nadzor in preprečevanje bolezni v Atlanti, ZDA, in ko je umrl maja 2013, so pregledali vzorce tkiv (New England Journal of Medicine, 2015, 373.1845-1852, doi: 10.1056 / NEJMoa1505892).

Sl. 2 Računalniški tomogram prsnega koša (prerez). V pljučih obstaja več tumorjev, ki jih tvori celice iz črevesja.

Tumorske celice so bile maligne: monomorfne, z velikim jedrom, so se razlikovale zaradi neurejene rasti in invazije v druga tkiva.S svojim videzom ni bilo mogoče sklepati, da spadajo v kompleksen večcelični organizem, kot je trakulja. Vendar pa je analiza DNK pokazala, da gre za celice celic v obliki palice. H. nana. Ta primer ni podoben prejšnjim dvema, ko je pripadnost celic črvi določal očes.

Škrlatna tkiva se razlikuje od več tisoč drugih vrst trakov, saj gre skozi ves razvojni cikel v črevesju sesalca. Okužba je skoraj asimptomatična. Včasih ličinke črva pridejo iz črevesja v bezgavke in od tam do drugih organov. Zdrav imunski sistem jim ne dovoljuje, da se tam razvijajo, pacient pa je imel aids.

V ličinkih plavuti so številne pluripotentne izvorne celice. Ujeli so se v novo okolje, ne da bi prejele običajne signale, namesto da bi razlikovale in oblikovale odraslega črva, so preprosto začele deliti. Raziskovalci so odkrili mutacije v več regulatornih genih, ki ustrezajo onkogenom sesalcev. Te mutacije spodbujajo dolgoročno proliferacijo celic.

Maligna preobrazba H. nana Morda je pogost pojav v državah, kjer so aids in parazitske okužbe pogosti.Okužba se zlahka pozdravi tudi na stopnji invazije tkiva na ličinke, vendar ni znano, kako učinkovito je zdravilo v primeru nenadzorovane delitve matičnih celic črvov. Parazitski črvi imajo ponavadi celični mehanizmi invazije v tkiva gostitelja in zaščito pred imunskim sistemom. Ti mehanizmi se lahko uporabljajo med malignim preoblikovanjem v gostitelju. Morda je povezava med okužbo in rakom težja, kot se običajno verjame. Ali je tumor povzročil H. nanaznanstveniki ne vedo.

Pravi človeški prenosljivi tumorji se najdejo, čeprav redko. Takšni primeri so povezani predvsem z nosečnostjo ali presaditvijo, redko se pojavijo med operativnimi operacijami. Transplantacija organov in tkiv spremlja imunosupresija, kar ustvarja ugodne pogoje za prenos rakavih celic. Praviloma melanoma in celice levkemije / limfoma vstopijo v telo prejemnika predvsem zaradi visoke zmogljivosti metastaze teh tumorjev. Opisana sta dva primera okužbe med nosečnostjo. Embryo in placenta so imunoprivate regije, v katerih pojav antigena ne povzroča imunskega odziva.V enem primeru je mama trpela zaradi levkemije, tumorske celice pa so se pojavile v modih plodov, drugem imunoprivatnem organu. Otrok je razvil limfom, na njem je moral delovati. V drugem primeru je materinski levkemični celični genom vseboval delecijo, ki je prizadela regijo histokompatibilnih genov, zato telo dojenčkov ni zaznalo teh celic kot tuje in tumor se je ukoreninil.

Do sedaj je bil spontani prenosljivi rak opisan v samo štirih vrstah na celotnem planetu, od katerih so trije sesalci (Slika 3), znanstveniki pa ne izključujejo pojavljanja novih vrst transmisivnih tumorjev v njih. Morda bodo metode prenosa drugačne, kot je laktacija. Sesalci (in njihovih 5500 vrst) predstavljajo le desetino celotnega števila vretenčarjev, pri pticah, dvoživkih, plazilcih in ribah pa obstaja veliko vrst malignih tumorjev. Nekdo bi pričakoval, da bodo imeli prenosljiv tumor, ne pa tudi.

Sl. 3 Znani primeri malignega tumorja pri spontanem prenosu

Zakaj se je takšna situacija razvila, ni jasna. Morda so se sesalci izkazali kot posebej primerni takson za razvoj vektorskih vrst raka.V vsakem primeru je treba ugotoviti, pod kakšnimi pogoji se pojavijo, kako se razmnožujejo, koliko celic je potrebno za začetek rasti tumorja v novem gostitelju, na katerem je odvisna regresija. Ni razloga za paniko, vendar ne smemo izgubljati pozornosti.

Literatura
Ostrander E. A., Davis B. W., Ostrander G. K. Prenosljivi tumorji: paradigma raka // Trendi v genetiki, 2016, 32,1-15, doi: 10,1016 / j.tig.2015.10.001


Like this post? Please share to your friends:
Dodaj odgovor

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: